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因此用于PCR反應(yīng)的塑料耗材必須避免存在污染物和抑制劑，同時又具有可保障最佳PCR效果的高質(zhì)量。
01
塑料耗材組成
材料
PCR / qPCR耗材通常由聚丙烯制成，因為它是惰性的并且能夠承受熱循環(huán)過程中溫度的快速變化。聚丙烯的惰性性質(zhì)使其對于反應(yīng)物質(zhì)的吸收降低至最小，確保獲取最佳的PCR結(jié)果。為了進(jìn)一步保障在純度和生物兼容性方面的批次間一致性，應(yīng)當(dāng)在生產(chǎn)過程中使用全新未循環(huán)使用的醫(yī)學(xué)級或分子生物學(xué)級高品質(zhì)聚丙烯原料。請注意，某些PCR / qPCR板邊框用更強(qiáng)的聚碳酸酯框 制成，以與高通量機(jī)器人應(yīng)用兼容。
顏色
PCR管和板通常可提供多種不同的顏色形式，以便于對于樣品的視覺區(qū)分和鑒別，特別是在高通量實驗中。盡管耗材的顏色對DNA擴(kuò)增沒有影響，但在設(shè)置實時PCR或qPCR 的反應(yīng)時，與透明耗材相比，我們更推薦使用白色耗材，以實現(xiàn)靈敏和準(zhǔn)確的熒光檢測。
白色耗材通過阻止熒光折射出管（圖2A）來提高qPCR數(shù)據(jù)的靈敏度和一致性。折射被最小化時，更多的信號被反射回檢測器，從而增加信噪比（圖2B）。此外，白色管壁可阻止熒光信號傳遞至PCR儀模塊，避免被吸收或不一致地反射熒光信號，從而使重復(fù)實驗（圖1B）中的差異降至最低。在極少數(shù)情況下，如果熒光探測器由于白色孔的信號反射增強(qiáng)而過飽和，可以使用磨砂孔替代。
02
生產(chǎn)概況
防止灰塵和生物學(xué)污染物
為了避免可干擾DNA擴(kuò)增的污染，PCR/qPCR塑料耗材應(yīng)不含核酸酶和DNA的污染。盡管如高壓和輻射等滅菌方法可去除細(xì)菌和DNA酶，但這些方法并不能去除灰塵和DNA殘留。殘留的灰塵客戶可能會抑制PCR，而片段化的DNA依然可作為模板從而產(chǎn)生非特異性的擴(kuò)增。
因此，在生產(chǎn)這些塑料耗材時，從制模到最終的包裝都必須在具有顆粒數(shù)量限制的設(shè)施環(huán)境中進(jìn)行。例如，100,000級潔凈室允許在立方英尺空氣中不超過100,000個直徑≥0.5μm的顆粒。這些類型的設(shè)施符合國際標(biāo)準(zhǔn)化組織（如ISO 9001 ）規(guī)定的嚴(yán)格指導(dǎo)原則，以防止灰塵和生物污染。
質(zhì)量保證檢驗
為了確保質(zhì)量，生產(chǎn)商可能需要對PCR/qPCR塑料耗材進(jìn)行視覺或物理檢驗其完整性，以確保對于反應(yīng)成分保護(hù)。可以執(zhí)行物理測試來評估樣品孔的蒸發(fā)，密封和電連續(xù)性以檢查泄漏。對于生物測試，塑料耗材會進(jìn)行某些DNA目標(biāo)分子的qPCR擴(kuò)增，以評估核酸酶和人類DNA的污染。生產(chǎn)商對于經(jīng)歷過這些嚴(yán)格檢驗的PCR/qPCR塑料耗材可提供相應(yīng)的檢測報告書。
